意義
在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應(yīng)用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
適用場景
1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用;
2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點;
3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽;
5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物;
6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。
酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點
1、無需純化蛋白;
2、檢測在活1細胞內(nèi)進行,可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實情況;
3、檢測的結(jié)果是基因表達產(chǎn)物的積累效應(yīng),植物原位雜交技術(shù)服務(wù),因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用;
4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器1官、細胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫,并能分析細胞質(zhì)、細胞核等多種亞細胞部位的蛋白。
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